本文刊于：岭南心血管病杂志，，26（04）：-
作者：樊伟*1，王晓叶2，张丽娥3
单位：1.西安医院心血管内科；2.医院医教科；3.西安医院心内科
摘要目的
检测扩张型心肌病（dilatedcardiomyopathy,DCM）患者血清抗*覃碱型乙酰胆碱受体抗体（muscarinicacetylcholinereceptorantibody，CHRM3-Ab）与白细胞介素（interleukin,IL）-27的浓度，分析其与DCM疾病的关系。
方法
选取年6月至年3月西安医院收治的例DCM患者为研究组，根据纽约心脏协会（NewYorkHeartAssociation,NYHA）心功能分级，NYHAⅡ级76例，NYHAⅢ级例，NYHAⅣ级86例；选取同期经冠状动脉计算机断层扫描血管造影（CTA）、心脏超声等检查无异常的健康体检者名为对照组。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清CHRM3-Ab与IL-27浓度，利用常规二维超声心动图检查受试者左心室射血分数（leftventricularejectionfraction,LVEF）、左心室舒张末期内径（leftventricularend-diastolicdimension,LVEDD）、左心室舒张末期容积（leftventricularend-diastolicvolume,LVEDV）、左心室短轴缩短率（leftventricularfractionalshortening,LVFS）、左心室收缩末期容积（leftventricularend-systolicvolume,LVESV）。
结果
研究组LVEDD、LVESV、LVEDV较对照组显著升高，差异有统计学意义（P0.05）。研究组LVEF、LVFS较对照组显著降低，差异有统计学意义（P0.05）。研究组血清CHRM3-Ab浓度显著高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）。研究组血清IL-27浓度显著低于对照组，差异有统计学意义（P0.05）。随着DCM患者NYHA心功能分级升高，其血清IL-27浓度逐渐降低（P0.05），血清CHRM3-Ab浓度逐渐升高（P0.05）；随着DCM患者NYHA心功能分级升高，LVEDD、LVESV、LVEDV逐渐升高（P0.05），LVEF、LVFS逐渐降低（P0.05）。Pearson相关分析结果显示，DCM患者血清CHRM3-Ab浓度与IL-27浓度呈负相关（P0.05）；血清CHRM3-Ab浓度与LVEDD、LVESV、LVEDV呈正相关，与LVEF、LVFS呈负相关（P0.05）；血清IL-27浓度与LVEDD、LVESV、LVEDV呈负相关，与LVEF、LVFS呈正相关（P0.05）。受试者工作特征曲线分析结果显示，血清CHRM3-Ab诊断DCM的曲线下面积为0.，灵敏度为56.90%，特异度为85.00%；血清IL-27诊断DCM的曲线下面积为0.，灵敏度为91.70%，特异性为87.00%。
结论
DCM患者血清IL-27较CHRM3-Ab对DCM具有更高的诊断价值，IL-27可作为DCM诊断的生物标志物。
扩张型心肌病（dilatedcardiomyopathy,DCM）是常见的心脏疾病之一，患病后可导致患者出现心律失常、进行性心力衰竭、血栓栓塞等并发症，严重者甚至猝死[1]。目前临床上尚无针对该疾病的有效治疗措施，其预后极差，5年生存率仅为40%[2]。DCM的发病机制至今尚不完全清楚，研究表明，免疫机制、遗传因素及病*感染等在其发病中发挥重要作用[3-4]。临床研究表明，自身免疫病变引起的进行性心肌损伤、病*性心肌炎（viralmyocarditis,VMC）持续病*感染可能与DCM发病关系密切，因此，有学者认为VMC和DCM是同一病理过程的不同阶段[5]。白细胞介素（interleukin，IL）-27具有调节免疫、炎症反应、抑制病*复制等作用，有研究发现其参与急性VMC与DCM的发病过程[6]。*覃碱型乙酰胆碱受体（muscarinicacetylcholinereceptor,CHRM）又称M受体，可通过自主神经调节心脏功能。研究发现，M受体亚型3（CHRM3）在缺血性心律失常等疾病中发挥重要作用[7]。近年研究表明，血清抗M受体抗体（muscarinicacetylcholinereceptorantibody，CHRM3-Ab）浓度与DCM发病密切相关[7-8]。本研究通过检测DCM患者外周血中IL-27与抗CHRM3抗体浓度，并分析其与DCM的关系，旨在为DCM病情监测寻找生物分子标记物。
1资料和方法
1.1一般资料
选取年6月至年3月西安医院收治的例DCM患者作为研究对象，其中男例，女例，年龄为（46.27±13.11）岁，根据纽约心脏协会（NewYorkHeartAssociation,NYHA）心功能分级，NYHAⅡ级76例，NYHAⅢ级例，NYHAⅣ级86例。DCM诊断标准[9]：（1）患者起病缓慢，有充血性心力衰竭症状；（2）心率增快，反复出现各种心律失常；（3）心电图显示心律失常、心脏肥大、心肌损害；（4）超声心动图显示心室内径扩大，室壁运动减弱，左心室射血分数减至50%以下；（5）X线检查显示阴影扩大；（6）检查左心室射血分数（leftventricularejectionfration，LVEF）45%或左心室舒张期末径（leftventricularend-diastolicdiameter，LVEDD）60mm。纳入标准：（1）符合DCM诊断标准；（2）患者无痛风、风湿病史；（3）患者及家属签署知情同意书；排除标准：（1）原发性高血压（高血压）、高血脂患者；（2）先天性心脏病、酒精性心肌病、冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）、心包疾病等患者；（3）严重自身免疫性疾病患者；（4）神经肌肉性疾病、肿瘤、肺源性心脏病患者；（5）原发性干燥综合征患者。选取同期经冠状动脉计算机断层扫描血管造影（CTA）、心脏超声等检查无异常的健康体检者名为对照组，其中男例，女88例，年龄为（45.82±12.69）岁。2组年龄、性别比例比较，差异无统计学意义（P0.05）。
1.2方法
样本采集：所有受试者均于清晨采取静脉血5mL，肝素抗凝，离心后取上清于无菌EP管内，放于-70℃冰箱中保存待检。血清CHRM3-Ab与IL-27浓度检测：采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清CHRM3-Ab与IL-27浓度，试剂盒均购自上海江莱生物科技有限公司，所有研究样本均3孔检测，取平均值。其他指标检测：利用常规二维超声心动图检查受试者LVEF、LVEDD、左心室舒张末期容积（leftventricularend-diastolicvolume,LVEDV）、左心室短轴缩短率（leftventricularfractionalshortening,LVFS）、左心室收缩末期容积（leftventricularend-systolicvolume,LVESV）。
1.3统计学分析
所有统计学分析均使用SPSS20.0软件完成。计量资料以（均数±标准差）表示，行t检验；计数资料采用[n（%）]表示，行卡方（χ2）检验；采用Pearson检验对DCM患者血清CHRM3-Ab、IL-27浓度进行相关性分析，对DCM患者血清CHRM3-Ab、IL-27浓度与超声心动图测量参数的相关性进行分析；利用受试者工作特征曲线（receiveroperatingcharacteristiccurve,ROC）分析血清CHRM3-Ab、IL-27浓度对DCM的预测价值。均以P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.12组受试者一般临床资料及常规超声心动图测量参数比较
2组受试者年龄、心率、性别[男：（/）vs.（/），χ2=0.，P=0.]比较，差异无统计学意义（P0.05）；研究组LVEDD、LVESV、LVEDV显著高于对照组，LVEF、LVFS显著低于对照组，差异有统计学意义（P0.05），见表1。
2.22组受试者血清CHRM3-Ab与IL-27浓度比较
研究组患者血清CHRM3-Ab浓度显著高于对照组，血清IL-27浓度显著低于对照组，差异有统计学意义（P0.05），见表2。
2.3不同心功能分级患者血清CHRM3-Ab与IL-27浓度比较
NYHAⅡ级组患者血清CHRM3-Ab浓度显著高于对照组，NYHAⅢ级组患者血清CHRM3-Ab浓度显著高于NYHAⅡ级组患者与对照组，NYHAⅣ级组患者血清CHRM3-Ab浓度显著高于NYHAⅢ级、NYHAⅡ级组患者及对照组，差异均有统计学意义（P0.05）；NYHAⅡ级组患者血清IL-27浓度显著低于对照组，NYHAⅢ级组患者血清IL-27浓度显著低于NYHAⅡ级组患者与对照组，NYHAⅣ级组患者血清IL-27浓度显著低于NYHAⅢ级、NYHAⅡ级组患者及对照组，差异均有统计学意义（P0.05），见表3。
2.4不同心功能分级患者常规超声心动图测量参数比较
NYHAⅣ级组患者LVEDD、LVESV、LVEDV显著高于NYHAⅢ级组、NYHAⅡ级组患者及对照组，LVEF、LVFS浓度显著低于NYHAⅢ级组、NYHAⅡ级组患者及对照组，差异均有统计学意义（P0.05）；NYHAⅢ级组患者LVEDD、LVESV、LVEDV显著高于NYHAⅡ级组患者与对照组，LVEF、LVFS显著低于NYHAⅡ级组患者与对照组，差异均有统计学意义（P0.05）；NYHAⅡ级组患者LVEDD、LVESV、LVEDV显著高于对照组，LVEF、LVFS显著低于对照组，差异均有统计学意义（P0.05），见表4。
2.5扩张型心肌病患者血清CHRM3-Ab与IL-27浓度的相关性
DCM患者血清CHRM3-Ab浓度与IL-27浓度呈负相关（r=-0.，P＜0.05），见图1。
2.6扩张型心肌病患者血清CHRM3-Ab、IL-27浓度与超声心动图测量参数的相关性
DCM患者中，血清CHRM3-Ab浓度与LVEDD、LVESV、LVEDV呈正相关，与LVEF、LVFS呈负相关；血清IL-27浓度与LVEDD、LVESV、LVEDV呈负相关，与LVEF、LVFS呈正相关，见表5。
2.7血清CHRM3-Ab、IL-27浓度对扩张型心肌病的预测
血清CHRM3-Ab浓度预测DCM的灵敏度为56.90%，特异度为85.00%，截断值为.pmol/L，曲线下面积为0.（95%CI:0.~0.，P＜0.05）；血清IL-27预测DCM的灵敏度为91.70%，特性为87.00%，截断值为0.ng/mL，曲线下面积为0.（95%CI:0.~0.，P＜0.05），见图2、图3。
3结论
DCM是一类以左心室、右心室或双腔扩大和收缩功能障碍为特征的心肌病，是临床上常见的心肌疾病类型，可导致心律失常、心力衰竭，严重者可导致血栓栓塞及猝死[1]。DCM的发病机制尚未完全清楚，病*持续感染、自身免疫抗体及细胞因子引发的免疫反应被认为是慢性心肌炎向DCM演变的主要机制。另有研究表明，心肌纤维化可引起心脏传导性及自律性异常，导致DCM[10]。此外，交感神经激活、心肌细胞离子通道异常、电解质紊乱、患者自身免疫异常也是导致DCM的原因[11]。
IL-27属于IL-6/IL-12家族，具有调控炎症、调节免疫以抑制病*复制作用[12]。已有研究报道，IL-27浓度升高与心肌炎症小鼠病情缓解有关，提示其在心肌炎症中可能有抑制炎症的作用[13]。有实验数据显示，急性VMC小鼠心肌组织IL-27浓度显著低于健康组，表明IL-27可能与急性VMC发病有关[13]。有研究表明，DCM患者血清IL-27浓度显著低于健康人[6]。另有研究者认为，小鼠VMC发展为DCM期后几乎无炎性细胞浸润，血清IL-27浓度无明显变化[14]。本研究检测结果显示，DCM患者血清IL-27浓度显著低于对照组，与Chen等[6]研究结果一致，提示血清IL-27浓度降低可能与DCM发病有关。有报道提示，病*性VMC发生后，患者体内发生病*抗原与抗体反应，对心肌细胞产生损害，导致心肌细胞变性、坏死，形成心肌纤维化，进而导致心脏进行性扩大以及收缩能力的减弱[15-16]。本研究推测IL-27可能通过参与炎症反应、心肌纤维化导致DCM，具体机理有待进一步实验验证。本研究结果显示，随着DCM患者NYHA心功能分级升高，血清IL-27浓度显著降低，表明血清IL-27浓度可能与DCM患者病情进展有关，推测可能是低浓度的IL-27对纤维化因子——转化生长因子-β（transforminggrowthfactor-β,TGF-β)抑制减弱，造成心肌纤维化加重，进而导致心脏功能降低。
M受体是一种单链跨膜糖蛋白，属于G蛋白耦联受体超家族，具有介导平滑肌收缩、腺体分泌、心肌收缩等生理功能，共有M1~5五个亚型[17]。M受体分布具有组织特异性，其中CHRM2主要分布于心肌组织，已有研究表明，DCM患者血清提纯的抗CHRM2抗体可抑制心肌CHRM2受体与配体结合[18]。CHRM3主要分布于外分泌腺，有研究报道，哺乳动物心肌也存在CHRM3，研究发现CHRM3与CHRM2具有相似的负性肌力和负性频率作用[19]。另有研究发现，CHRM3-Ab可拮抗小鼠膀胱平滑肌上的CHRM3，抑制平滑肌副交感神经系统信号传递[20]。本研究结果显示，DCM患者血清CHRM3-Ab浓度显著高于对照组，提示血清CHRM3-Ab浓度可能与DCM发病有关。进一步研究结果表明，随着DCM患者NYHA心功能分级升高，血清CHRM3-Ab浓度升高，提示血清CHRM3-Ab浓度可能与DCM病情进展有关。近年来有研究表明，人心脏中存在CHRM3功能性表达，激动CHRM3可介导IKM3电流发挥负性肌力和负性频率作用，抑制心律失常发生[21]。另有研究表明，CHRM3对心肌缺血大鼠的心肌细胞凋亡有保护作用。本研究推测，DCM患者血清CHRM3-Ab可能对心肌CHRM3发挥拮抗功能，间接参与DCM发病及病情进展。
随着DCM患者NYHA心功能分级升高，LVEDD、LVESV、LVEDV逐渐升高，LVEF、LVFS逐渐降低。Pearson检验结果显示，DCM患者血清CHRM3-Ab与IL-27浓度呈负相关，血清CHRM3-Ab浓度与LVEDD、LVESV、LVEDV呈正相关，与LVEF、LVFS呈负相关；血清IL-27浓度与LVEDD、LVESV、LVEDV呈负相关，与LVEF、LVFS呈正相关。根据本研究前述结论，推测DCM发生可能涉及心肌纤维化、炎症反应、电解质紊乱等多种因素共同作用。血清CHRM3-Ab诊断DCM的ROC曲线下面积为0.，灵敏度较低，仅为56.90%；血清IL-27诊断DCM的ROC曲线下面积为0.，灵敏度、特异性均较高，表明血清IL-27较CHRM3-Ab对DCM具有更高的诊断价值，提示检测血清IL-27浓度有助于早期诊断DCM。
综上所述，DCM患者血清CHRM3-Ab浓度显著高于对照组，研究组血清IL-27浓度显著低于对照组，血清IL-27较CHRM3-Ab对DCM具有更高的诊断价值。血清CHRM3-Ab、IL-27可能在DCM疾病发生中发挥作用，血清IL-27可作为DCM诊断的生物分子标志物。本研究样本量较小，在后续研究中会扩大样本量。
参考文献（略）
敬请